药康内部实验证实无菌鼠粪便16S rDNA测序是可以检测到序列的，原因可能是食物中的细菌虽然经过灭菌操作死亡，但残余的细菌16S rDNA片段并未完全降解，16S测序前会经过PCR扩增，残余的微量16S rDNA片段经扩增后达到测序需求的量，因此测序后会产生结果。但测序结果表明无菌鼠的16S rDNA测序结果与正常小鼠差异非常大，从侧面证实了无菌鼠粪便的16S测序结果并非是肠道自然状态下定植了菌群产生的污染。

无菌小鼠病毒项目检测在内部检测和第三方外检中均按要求进行，检测项目参照国内外SPF级小鼠关注的病毒类型，目前共计22种，实时跟踪国内外病毒新流行趋势，联合采用血清学和分子学方法进行检测。

因病毒组学非常规监测项目，暂未进行，如客户咨询或实验需要，可以配合进行前期样品处理和外部送检等工作。

病毒组学检测方法：小鼠粪便使用PBS均质化后，过滤除去细菌及颗粒，同时使用核酸消化游离核酸，随后提取病毒核酸进行二代测序，测序序列拼接后与数据库比对，保留与病毒数据库匹配的序列进行后续分析。

药康无菌小鼠的检测方法包含培养法、PCR法及革兰氏染色辅助检测。

培养法参考GB/T 14926.41-2001，采用多种培养基对细菌、真菌进行培养，引进厌氧培养系统，增加肠道厌氧菌的检出率，同时在检测周期上进行了验证优化，快速出具检测结果。

PCR方法采集小鼠肠道内容物或粪便样品，无菌状态下提取样品核酸，优化PCR前处理过程，去除可能对PCR产生干扰的因素，可高通量、更灵敏地进行无菌检测。

革兰氏染色方法作为参考辅助方法，具有操作简单、迅速、样品易获取的优点，通过小鼠新鲜粪便染色，在30-60min内快速检测阳性污染样品，结合培养/PCR方法，快速、全方位对无菌小鼠进行检测。

药康的无菌小鼠每季度送一次第三方检测，可以出具第三方检测报告。

无菌小鼠运输困难的点就在于运输所使用的器具均需严格的灭菌，同时在小鼠的传出和传入过程中做到严格的无菌操作。

目前药康少量运输主要是运输罐，金属材质，分布有透气孔，再覆盖特制滤材并密封。运输罐可高压，运输方便，每罐子2~3只，可航空。采用这种运输方式向苏州、杭州、北京、成都等国内数十家客户发鼠，抵达后客户第三方检测结果均合格。

超过20只以上就使用运输袖（Germ-Free Shipper Sleeve）。运输到客户后只要不打开，可以维持无菌至少5~7天。如在普通环境中打开立即污染。如有无菌隔离包，按照操作标准流程接鼠，可长时间维持无菌性。

当然可以自己搭建，但不建议自行搭建实验平台。

原因一：整个无菌体系对软硬件有严格的要求，自行搭建难度很大，至少需要摸索2~3年，延误整体实验周期。

原因二：无菌平台搭建和运行成本高，至少是数百万级别，如只是偶尔进行实验，成本浪费严重。

1）无菌鼠供应（B6、BALB/C、ICR、NCG、NCG-X、B6-IL10及相应的孕鼠、小仔等）；2）无菌净化；3）无菌实验（菌株培养、粪菌提取、单菌定植、菌群移植、特殊饲料造模等）；4）无菌实验操作类型（腹腔、测血糖、采血、灌胃、称重等）；5）抗生素清扫实验（单/多抗生素联用及其他与无菌类似的操作）；6）无菌硬件（隔离包、无菌物料、检测等）。

GF小鼠体内检测不到任何细菌、真菌、寄生虫、病毒（小鼠内源性病毒除外）；而SPF仅是检测不到特定的病原体，自身仍带有组成未知的微生物背景。

文献报道GF小鼠的寿命会略长于普通小鼠。

形态学方面，GF小鼠最明显的特征就是盲肠变大（部分食物组分缺少细菌对其进行消化，堆积在盲肠处），脾脏变小，淋巴结数量减少。免疫细胞数量降低且比例发生改变。心脏变小，血液体积降低。脂肪含量降低，基础代谢率降低，对高胆固醇饮食更为敏感。同时GF小鼠的繁殖能力更弱（交配频率及受精卵着床率均下降），腹部空间被盲肠挤占后生仔数减少。

目前无菌小鼠饲养繁育采用屏障环境+隔离环境，可以理解为在SPF级小鼠饲养的动物房内再加专用的无菌隔离器。无菌隔离器是无菌鼠与外界大环境中间的一道很重要的屏障。无菌小鼠所接触的所有物品，例如饲料、垫料、水等均需要经过严格的灭菌程序，并通过特殊的传递方式进入隔离器。

无菌小鼠在无菌隔离包内繁育，隔离包要求柔软无毒，换气次数温湿度等符合国标规定。无菌小鼠的繁育方法与SPF小鼠相同。配繁比一般为1:2，配繁周龄一般为8周。

目前小鼠运输过程中，每个车只配备一位师傅，如果将小鼠送货上门车辆将处于无人看守状态，车内小鼠得不到保障，并且许多单位停车环境紧张，随时需要挪车，所以原则上不送货上楼到门。