收集人类粪便样品时，粪尿分离，以截面方式取样，迅速置入装有粪菌保护液的收集管，密封；震荡摇散摇匀；尽快使用冰袋降温；转移到厌氧环境，生理盐水稀释粪便悬液后，依次通过无菌100目尼龙网和无菌200目尼龙网去除食物残渣，滤出液4000 xg，4℃离心10 min，弃上清，用初始体积的5倍体积的菌群保护液重悬菌体，分装至冻存管；以上操作控制在6小时内；分装的粪菌-20℃冻存4小时后，转移到-80℃冻存。菌群保护液：生理盐水含50%甘油，0.1% L-半胱氨酸。

目前药康没有菌株库，暂时无法提供菌株。但有稳定的合作供应商，可以推荐给客户，代理国内外各大菌库产品。同时药康有成熟的微生物培养平台，具备有氧、厌氧培养条件。客户可以提供菌株由我们进行培养，需要提供菌株的信息，应符合生物安全等级规定。

粪菌、单一菌株移植小鼠主要有灌胃注射和灌肠两种方式，多数选用灌胃注射。

菌株注射频次和剂量跟本身耐酸、耐胆盐等基本生理特性有关，大多数菌株移植无菌小鼠是单次注射，10⁸-10⁹CFU/只/次。粪菌分离自粪便，通常0.1g粪便可分离10⁹-10¹⁰CFU的菌量；无菌小鼠通常在1周之内移植粪菌2~3次，10⁹-10¹⁰CFU/只/次。

最初的文献报道无菌小鼠会对高脂饲料诱导的肥胖存在一定抗性，但使用的对照组普通小鼠为无菌小鼠放置于普通环境后得到，而非一直处于普通环境中成长起来。

后续有实验使用相同性别品系相同饲料进行实验，无菌小鼠展示出与普通小鼠类似的体重增长趋势。

还有其他文献也显示高脂饮食会使无菌小鼠体重显著上升，因此更多的证据显示无菌小鼠也是可以通过高脂饲料诱导肥胖的。

无菌净化是指把普通小鼠品系净化成GF级，主要分为2步，首先把小鼠净化至SPF级孕鼠，再通过剖腹产净化至无菌级。方法是无菌剖腹产后使用无菌代乳鼠进行代乳。

周期和费用主要取决于初始小鼠的数量和目的小鼠的数量，以项目的形式单独给报价和周期，包含净化后的无菌繁育部分。例如：1）小鼠繁育性能与B6相近，一批次提供6~8只性别不限的无菌后代，5万左右，周期3~4个月；2）繁育性能与B6相近，月供20只性别不限的小鼠，供应2-3批次，15万左右，周期1年左右。

目前大部分客户以实验外包的形式委托药康服务。

无菌实验的费用主要是无菌小鼠的费用和无菌隔离包的使用费，以及少量的操作费用。

例如做一个单一菌株定植实验，一组移植菌株6只，另一组对照6只，周期2周，终点小鼠取材或寄送活体小鼠。小鼠费用（12*2500=30000）、隔离包2个用2周费用（5000*2=1000）,合计4万左右。

无菌鼠作为实验平台的应用领域较广，只要是受到肠道菌群影响的生理生化过程及疾病的相关研究均可使用无菌鼠，包括但不限于肿瘤（肿瘤发生、免疫检查点抑制剂疗效）、自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎）、代谢性疾病（肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病）、神经系统疾病（阿尔兹海默症、帕金森症、孤独症）、中医中药、心血管系统疾病（动脉粥样硬化）、炎症性肠病、衰老、辐照损伤等。

无菌鼠的应用方式主要可分为三种：1）无菌鼠与SPF/普通小鼠对比，鉴定微生物的缺失对宿主生理及疾病表型的影响；2）用于限定菌株/菌群的定植实验，可以确定菌株与疾病的因果关系；3）定植限定菌群后进行不同处理，研究不同治疗手段与特定菌群间的相互影响。

药康内部实验证实无菌鼠粪便16S rDNA测序是可以检测到序列的，原因可能是食物中的细菌虽然经过灭菌操作死亡，但残余的细菌16S rDNA片段并未完全降解，16S测序前会经过PCR扩增，残余的微量16S rDNA片段经扩增后达到测序需求的量，因此测序后会产生结果。但测序结果表明无菌鼠的16S rDNA测序结果与正常小鼠差异非常大，从侧面证实了无菌鼠粪便的16S测序结果并非是肠道自然状态下定植了菌群产生的污染。

无菌小鼠病毒项目检测在内部检测和第三方外检中均按要求进行，检测项目参照国内外SPF级小鼠关注的病毒类型，目前共计22种，实时跟踪国内外病毒新流行趋势，联合采用血清学和分子学方法进行检测。

因病毒组学非常规监测项目，暂未进行，如客户咨询或实验需要，可以配合进行前期样品处理和外部送检等工作。

病毒组学检测方法：小鼠粪便使用PBS均质化后，过滤除去细菌及颗粒，同时使用核酸消化游离核酸，随后提取病毒核酸进行二代测序，测序序列拼接后与数据库比对，保留与病毒数据库匹配的序列进行后续分析。