一、体外药物活性筛选

1. 细胞模型：HepG2，人源化小鼠组织的原代细胞（如肝脏原代细胞）等

2. 试验设计：（1）非修饰siRNA的细胞转染以及靶基因水平检测；（2）修饰siRNA的细胞自由摄取以及靶基因水平检测。

3. 检测指标：q-PCR，WB，Elisa

二、体内药物分布

1. 动物模型：BALB/c

2. 试验设计：小核酸药物（荧光基团标记）投递至动物体内后分时间段检测药物在各脏器中的分布，以评估药物在进入体内后的分布特点或比较不同修饰药物在体内的分布特点。

3. 检测指标：活体荧光成像

三、non-GLP安全性评价

1. 动物模型：C57BL/6J等近交系，药靶基因人源化小鼠

2. 试验设计：单次给药毒性测试，多次给药毒性测试

3. 检测指标：体重、临床观察、肝功（ALT，AST），肾功（BUN，CREA），细胞损伤（LDH），免疫原性检测（Elisa Kit），大体剖检观察，组织病理检测等

四、体内药理药效

1. 动物模型：药靶基因人源化小鼠（B6-hPCSK9，B6-hAPOC3-Tg，B6-hAGT，B6-hXDH，B6-hAPOB-Tg等，持续更新中，敬请关注药筛鼠计划）

2. 试验设计：（1）药靶基因人源化小鼠给予相应药物干预后检测靶基因的敲降效率及上下游关联基因的表达水平；（2）药靶基因人源化小鼠经特殊饮食或其他方式构建疾病模型后给予药物干预，观测疾病指标的变化。

3. 检测指标：体重、血脂四项、肝功、肾功、血液中蛋白表达（Elisa kit），组织器官中基因表达水平（q-PCR，WB or Elisa kit等），组织病理学检测（H&E，IHC等）

案例1：PCSK9人源化小鼠（携带人源化3’UTR）在小核酸临床前药效评价中的应用

图1. Inclisiran单次皮下给药后显著降低血液中hPCSK9的表达水平，且对hPCSK9的抑制效果可维持到单次给药后56天。

案例2：人源APOC3转基因小鼠在小核酸临床前药效评价中的应用

图2. 靶向hAPOC3的小核酸单次皮下给药后显著降低APOC3人源化小鼠血液中的甘油三酯（TG）、总胆固醇（Chol）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平

图3 靶向hAPOC3的小核酸单次皮下给药后显著降低APOC3人源化小鼠血液中人源APOC3的表达